1、实验核心目标

• 依托 Wave 生物反应器搭建3D 动态悬浮培养体系，摆脱传统二维静态培养局限；

• 实现 γδT 细胞高效增殖，突破传统培养密度上限，达成千万级 /mL 高密度扩增；

• 优化动态培养参数，包括摇摆速度、灌流速率、溶氧控制等关键工艺节点提升细胞活率、细胞纯度与功能性，保证扩增后 γδT 细胞质量达标；

• 验证 Wave 反应器工艺放大可行性，建立可直接中试、工业化量产的标准化扩增工艺，打通 γδT 细胞量产工艺闭环。

2、整体实验设计

本次实验选取健康人外周血为起始原料，采用华辰生物 γδT细胞激活扩增试剂盒 kit08，完成外周血γδT 细胞富集，初始 γδT 细胞定向诱导、激活；

• 实验采用"静态培养瓶扩增-WAVE反应器规模化"的两阶段策略，既保证细胞适应期的稳定性，又充分发挥动态灌流培养的高密度优势。

• 关键控制点包括：原代分离纯度、静态-动态转换时机、灌流速率动态调节以及全程质量监控。

分组对照传统静态培养体系、Wave 生物反应器 3D 动态悬浮培养体系，控制培养基灌流量、活化因子浓度、培养温度、CO₂浓度、接种密度等变量，全程监控细胞增殖速率、活率、细胞表型、代谢指标；实时采集培养全过程数据，绘制标准化 3D 增殖动力学曲线，对比两类培养体系综合培养成效。

本次实验选用Wave 波浪式生物反应器作为核心培养设备，区别于搅拌式生物反应器、传统静置培养体系，完美适配免疫细胞脆弱、不耐剪切力、需充足溶氧的培养特性。

wave设备及培养基试剂耗材准备

1、wave设备核心原理

Wave 反应器依托一次性无菌细胞培养袋，通过设备平台低频往复波浪式摇摆运动，带动袋内培养基与细胞形成柔和波浪流场，无需机械搅拌桨，依靠流体波浪运动完成培养基混匀、氧气自发交换、营养物质均匀输送，全程构建温和、低剪切力的 3D 悬浮培养微环境。

2、适配 γδT 细胞培养核心优势

• 超低剪切力损伤：无搅拌机械剪切力，最大程度保护 γδT 细胞膜结构与细胞活性，避免细胞凋亡、功能失活；

• 溶氧效率大幅提升：波浪运动扩大气液接触面积，溶氧速率是传统培养袋 2-3 倍，满足高密度细胞氧气代谢需求；

• 营养代谢均匀分布：动态灌流培养消除培养体系营养梯度、代谢废物堆积问题，规避局部细胞营养匮乏、乳酸堆积抑制增殖问题；

• 一次性密闭体系：全封闭无菌培养模式，杜绝外源污染，降低细胞污染风险，符合细胞药物 GMP 生产合规要求；

• 工艺线性可放大：从实验室小体积培养，可线性放大至百升级工业化量产规模，工艺参数无需二次优化；

• 自动化闭环调控：实时监测 DO、pH、温度参数，自动化调控培养环境，减少人工干预，批次一致性拉满。

实验成果展示：3D 培养数据 + 实拍样本，成效直观落地

本次 Wave 反应器 3D 动态扩增实验，经过周期培养，γδT 细胞扩增成果全面达到预期结果，各项核心指标优异，下文结合细胞增殖动力学曲线、培养实拍图、核心检测数据全方位公示成果：

1、γδT 细胞 3D 动态增殖曲线

• 增殖性-7天内实现近20倍扩增，增速稳定且持续，证明培养体系对细胞分裂的支持性强。

• 健康度-活率全程＞92%，死亡风险极低，培养环境“友好”。

• 稳定性-细胞形态、聚集状态无异常波动，代谢物浓度可控，体系稳定性好

对比传统静态培养平缓增殖趋势，Wave 反应器 3D 培养体系下，γδT 细胞对数增殖周期更长、增殖速率更快，延迟进入平台期； Wave 动态培养体系细胞持续高效增殖，细胞增殖斜率显著优于对照组，工艺增殖优势凸显。

2、反应器细胞培养实景实拍

实拍可见：反应器培养袋内细胞悬浮均匀、无细胞沉降结块；显微镜下 γδT 细胞形态圆润、胞体饱满、聚团生长状态优良，无细胞碎片、凋亡细胞占比较低，细胞生长状态较佳。

3、核心实验硬核数据

• 本次2.5L WAVE灌流培养，D7细胞密度19.24×10⁶/mL，突破行业传统 γδT 细胞培养密度 3 倍以上；较平面培养 (3×10⁶/mL)提升6.4倍；总细胞数481亿，满足产业化治疗剂量级别需求。

• 后续采用5L wave灌流培养体积，有望实现千亿级别γδT 细胞单批次产量。

• 细胞活率：收获终期细胞活率＞92%，细胞活性优异；

• γδT 细胞纯度：特异性目标细胞占比97%，定向扩增纯度达标；

• 细胞扩增倍数：相较于初始接种细胞，整体扩增倍数大幅提升，量产产能实现跨越式提升；

• 代谢指标：体系乳酸、葡萄糖代谢指标可控，无代谢废物蓄积，培养体系稳定性优异。